大鼠載脂蛋白A1（apo-A1）酶聯免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書
更新時間：2012-07-26 | 點擊率：2718
大鼠載脂蛋白A1（apo-A1）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：大鼠載脂蛋白A1（apo-A1）酶聯免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中載脂蛋白A1（apo-A1）的含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠載脂蛋白A1（apo-A1）水平。用純化的大鼠
載脂蛋白A1（apo-A1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入載脂蛋白
A1（apo-A1），再與HRP 標記的載脂蛋白A1（apo-A1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復
合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的
作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的載脂蛋白A1（apo-A1）呈正相關。用酶標
儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠載脂蛋白A1（apo-A1）
的含量。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液30ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（1800 μg/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本處理及要求
1．血清、血漿標本可直接測定；
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反
復凍融。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別
加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl 分
別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第
三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉；再各取50μl 分別加到第五、第六孔中；再在第五、
第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加
到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、
第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（ 稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為
1200 μg/ml ，800 μg/ml，400μg/ml，200μg/ml，100 μg/ml）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好
控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔OD 值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
6．本試劑不同批號組分不得混用。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．底物請避光保存。
檢測范圍：
50 μg/ml -1500 μg/ml
規格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月
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